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Présentation du matériel Nous avons ici besoin de ces différents éléments: Pot silice, les deux éluants: eau salée à 40g/L, puis éthanol, entonnoir, sable et coton, colonne en verre, béchers, pipettes pasteur, propipettes, verre à pied, solution contenant le mélange sirop menthe, support et tubes à essai, laine verte (contenant les colorants). Revenons sur quelques uns de ces éléments: Le pot de silice: il contient la phase stationnaire finement divisée à introduire dans la colonne, car toute séparation chromatographique implique l'écoulement d'une phase mobile au contact d'une phase stationnaire de grande surface. La colonne en verre: selon la quantité de produits à séparer et la qualité de la séparation, on choisira des colonnes de diamètre et de longueur plus ou moins importants. Les colorants du sirop de menthe ont été extraits à l'aide d'un morceau de laine préalablement lavé en milieu basique dans une solution d'ammoniac à 1% d'ammoniaque, puis rincé à l'eau. L'extraction se fait en milieu acide à l'aide d'acide acétique dilué, et le relargage s'effectue en milieu basique dans la solution ammoniacale à 1%.
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Colonnes en verre pour chromatographie Caractéristiques de Colonnes en verre pour chromatographie En verre borosilicaté 3. 3 de qualité supérieure, résistant aux produits chimiques et à utiliser avec SGEC-200-500 ou SGEC-060-500 dans les applications chromatographiques. 2 types: (A) avec robinet à pointeau en PTFE: robinet en Roteflo en PTFE pour un contrôle précis du débit d'éluant, disque fritté, col rodé pour réservoir et porosité 0 (B) avec robinet à cléf en PTFE: disque fritté Sinthered, robinet en PTFE (alésage: 0-2, 5mm) et rodage supérieur
On s'assure régulièrement de ne pas assécher la phase stationnaire, en vérifiant qu'il reste toujours de l'éluant au niveau du sable. Réalisation de l'expérience On amène le niveau d'éluant au niveau de la surface du sable. On peut alors déposer délicatement la solution de colorants en haut de colonne à la pipette Pasteur afin de ne pas perturber la surface de silice. On ouvre le robinet pour que les colorants arrivent au niveau de la silice. On rajoute quelques millilitres d'éluant et on ouvre de nouveau le robinet afin de s'assurer que toute la solution soit en tête de la colonne de silice. On peut alors ajouter l'éluant. Les premiers millilitres doivent toujours être ajoutés avec précaution à la pipette pasteur afin de ne pas perturber la surface de silice. Ensuite, on peut ajouter l'éluant plus rapidement en le versant directement dans la colonne. L'éluant utilisé ici dans un premier temps est l'eau salée, il permet l'élution de la tartrazine, alors que le bleu patenté V reste fortement retenu par la silice.
Après avoir récupéré la tartrazine, on change d'éluant pour récupérer le bleu patenté. On utilise ici de l'éthanol. En effet, la tartrazine a peu d'affinité pour la silice par rapport à l'éluant, qu'on utilise l'eau salée ou l'éthanol. C'est pourquoi elle est entraînée facilement. Par contre, le bleu patenté V développe plus d'interaction avec la silice que la tartrazine, et l'eau salée n'est alors pas un éluant capable de l'entraîner, contrairement à l'éthanol. Le bleu patenté est entraîné par la phase mobile, et il est récupéré dans un autre tube. Il est souvent utile de réaliser des chromatographies sur couche mince sur chaque tube pour vérifier où sont les composés à séparer, dans le cas où ceux-ci ne sont pas colorés. La technique de la chromatographie sur colonne permet la séparation des différents constituants d'un mélange, mais elle peut être utilisée couplée à un moyen de détection, comme par exemple une spectroscopie UV – visible ou une spectrométrie de masse et on obtient ainsi une chaîne complète automatisable d'analyse.
Les hauteurs sont fonctions des diamètres mais peuvent être aussi modulées suivant vos besoins L'épaisseur de nos colonnes est fonction de la pression ou du vide que vous souhaitez exercer